Meghatározás:
Pirogén: A pirogén olyan pirogén anyag, amely kóros testhőmérséklet-emelkedést okozhat, miután a szervezetbe injektálják. A tágabb értelemben vett pirogének közé tartoznak a bakteriális pirogének, az endogén nagy molekulatömegű pirogének, az endogén kis molekulatömegű pirogének és a kémiai pirogének. Az itt említett "pirogének" főként bakteriális pirogénekre utalnak, amelyek bizonyos mikroorganizmusok, baktériumtetemek és endotoxinok metabolitjai.
Enzimek: Mindenki tanult az enzimekről a középiskolában. Egyfajta biológiai katalizátorként az enzimek hatékonyan képesek katalizálni szervezetünkben zajló különféle biokémiai reakciókat. Amikor azonban a legtöbb termék azt mondja, hogy enzimmentes, valójában nem minden enzimre vonatkozik, hanem a nukleázokra. Sok gyártó ír DNáz-mentes és RNáz-mentes szavakat is, mindkettő ugyanazt jelenti. A nukleázok lebonthatják a nukleinsavmolekulákat. Vannak olyan enzimek, amelyek specifikusan lebontják a DNS-t vagy az RNS-t. Vannak kisebb specifitású enzimek is, amelyek mind a DNS-, mind az RNS-molekulákra hatnak.
Endotoxinok: Az endotoxinok a Gram-negatív baktériumok sejtjeiben lévő mérgező anyagok általános neve. Számos Gram-negatív baktérium sejtfalának alkotóeleme. A baktériumok lízise során felszabaduló toxin a lipopoliszacharid. Az általános vélekedés szerint az endotoxin egyfajta pirogén, amelyet a gyógyszergyártás során általánosan elfogadott: ha nincs endotoxin, akkor nincs pirogén. Ezért a gyártás során csak endotoxin vizsgálat végezhető pirogénvizsgálat nélkül.
Befolyás:
A pirogének és endotoxinok stimulálhatják a szervezetet és felmelegíthetik azt. Gyógyszerészeti, klinikai és egyéb területeken, a humán biztonság érdekében, általában követelmények vonatkoznak a pirogének és endotoxinok mennyiségére. A Kínai Gyógyszerkönyv egyértelmű módszereket ad a pirogének és endotoxinok kimutatására is. Amikor a nukleázok részt vesznek a molekuláris laboratóriumokban, mivel a DNS-bontás funkciójuk, valószínűleg lebontják a célmolekula-fragmenseket. Például a PCR-kísérletekben, ha nukleázok szennyezettek, előfordulhat, hogy nincs CT-érték, ami téves pozitív eredményeket eredményez. Ezért az olyan fogyóeszközök, mint a pipettahegyek és a PCR-hez kapcsolódó kellékek általában nukleázmentesek.
A pirogének és endotoxinok kimutatásával kapcsolatban:
Az alábbiakban röviden ismertetjük a gyógyszerkönyvben található pirogén- és endotoxin-vizsgálatok tartalmát.
Pirogén kimutatás: A Kínai Gyógyszerkönyv 1142 Általános fejezete leírja a nyúl módszer használatát a pirogén kimutatására. Használjon egészséges és minősített nyulakat, fecskendezzen be intravénásan a vizsgált készítményt a nyulakba, és figyelje meg a nyulak testhőmérsékletének emelkedését a megadott időn belül. A vizsgálati cikkel érintkező teszteszközöknek sterilnek és pirogénmentesnek kell lenniük. A pirogének eltávolítására általában száraz hősterilizálást (250 fok, több mint 30 perc) alkalmaznak, de más megfelelő módszerek is alkalmazhatók. Ha a vizsgált nyúl testhőmérséklete egy bizonyos időn belül egy bizonyos standardra emelkedik, a vizsgált termék pirogéntesztje nem megfelelőnek minősül.
Endotoxin kimutatás: Az endotoxin kimutatást korábban nemzetközi szinten Limulus reagens módszerrel végezték. A speciális módszerek közé tartozik a gél módszer és a fotometriás módszer. A Limulus reagens bakteriális endotoxinnal agglutinálva gél- vagy zavarosság-változást eredményezhet, és ennek mérésével az endotoxin-tartalom meghatározható. A Limulus reagens egy tengeri ízeltlábú patkórák véréből kivont reagens. Ezért világszerte nagy számban vadásznak a patkórákokra, amelyek országos másodfokú védettségű állattá váltak hazánkban. Jelenleg az FDA jóváhagyta a rekombináns C faktor módszerét, amely a Limulus reagenst váltja fel. Ezt a törvényt hazám Gyógyszerkönyvének vezérelvei is megemlítették.
Hogyan válasszunk:
Valójában nem nehéz választani e fogalmak megértése után. A lényeg az, hogy saját igényei szerint válasszon. Általában az enzim- és pirogénmentes fogyóeszközök gyakoribbak, míg az endotoxin-mentes termékek viszonylag ritkák. Ha maga a kísérlet nem támaszt magas követelményeket ezekkel szemben, akkor ténylegesen használhat közönséges fogyóeszközöket. Például centrifugálásnál, ha centrifugált sejtekről vagy kapcsolódó komponensekről van szó, akkor a legjobb, ha enzimek és pirogének nélküli centrifugacsöveket használunk, és ha csak közönséges folyadékról van szó, a centrifugálást egy közönséges centrifugacsőben is el lehet végezni. Ezen túlmenően ez sok felhasználó problémája is lesz. Amikor egyes kereskedőktől centrifugacsöveket vásárol, megkérdezik, hogy a centrifugacsöveket fel lehet-e használni. Ez a kérdés valójában a helyzettől függ, mivel a centrifugacsövet egyszer használták. Bizonyos mértékig szennyezett, és még a nyomás alatti gőzsterilizálás sem tudja teljesen megszüntetni ezeket a szennyeződéseket. Ezért, ha újra használják, az a felhasználó saját kísérleti igényeitől függ.
Végső soron minden termék a kísérletezőket és a kísérletezőket szolgálja. A termékek miatt nem tudod befolyásolni a kísérleteidet. Ehelyett saját kísérletei alapján kell kiválasztania a megfelelő termékeket.